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PeproTech細胞因子和蛋白常見問題解答

1.PeproTech細胞因子和蛋白產品的穩定性如何?

答:除非在產品說明書中特別注明,PeproTech的所有產品均為凍干粉,它們在室溫條件下非常穩定(至少1個月)。盡管如此,我們還是建議您在收到我們的產品后保存于-20oC,以確保蛋白100%的活性。對于大多數蛋白,重懸后在4oC僅能短期保存(約1周)。如想長期保存,請先配制成稀釋液(其中必須含有載體蛋白,如0.1% BSA,5%HSA,或10% FBS),然后分裝凍存于-20oC或-80oC。一定要避免反復凍融,因每次凍融均會引起蛋白的部分失活。具體、詳細的重懸和溶解方法請點擊查看,PeproTech細胞因子和重組蛋白溶解必讀。

2.為什么有時在管中看不到細胞因子或蛋白的凍干粉?

答:與市場上的許多蛋白產品不同,PeproTech的產品中均不含載體蛋白或其它添加物(如牛血清白蛋白(BSA),人血清白蛋白(HSA)和蔗糖等,并且是以最低含鹽量的溶液進行凍干的,因此凍干后常常不能形成白色網架結構,而是微量的蛋白在凍干過程中沉積在管內,形成很薄或肉眼不可見的透明蛋白層。打開管蓋前,我們建議您在小離心機中快速離心20-30秒,使附著在管蓋或管壁上的蛋白聚集于管底。我們的質控步驟保證每管中所含的蛋白量準確無誤,雖然有時您無法看到蛋白粉末,但管中的蛋白含量仍是非常精確的。

3.ED50和units/mg之間有何關聯?

答:ED50為半數有效濃度,其定義是可誘導50%最大反應的細胞因子濃度,這種活性表示法僅適用于劑量反應曲線呈S形的細胞因子。其實,可以將ED50的值接理解為1unit。如某種細胞因子或蛋白的ED50為1ng/ml,那么1ng/ml即可看作是1unit。那么我們也不難理解,1mg (1x106ng) 該細胞因子或蛋白中應含1x106/1 = 106units.ED50(ng/ml)轉化為units/mg的公式如下:

4.如何確定細胞因子的種屬交叉活性?

答:1) 除少數例外,大多數人類細胞因子對小鼠細胞均有活性。2) 許多小鼠細胞因子也可作用于人類細胞,但比活性可能低于對應的人類細胞因子。 3) IL-7等為數不多的人類細胞因子作用于小鼠細胞時比對應的小鼠細胞因子活性更強。4) 干擾素,GM-CSF, IL-3和IL-4等細胞因子種屬特異,對非同源細胞幾乎沒有活性。5)相反,成纖維細胞生長因子(FGFs)和神經營養素(neurotrophins)高度保守,在不同動物種屬細胞上均具有很好的活性。當然,僅憑以上規律無法判斷許多其它細胞因子的交叉反應活性。如您在這方面存在疑問,請與PeproTech中國代表處聯系,我們會給您準確的答復。

5.到底什么是無動物成分(Animal-Free)的重組蛋白?

答:誠然,PeproTech生產的重組蛋白均是人或小鼠和大鼠的,又怎么說成是Animal-Free,即無動物成分的呢?真正的原因是:這里的Animal-Free是指在表達人、小鼠或大鼠的重組蛋白的過程中未使用任何動物來源的材料,而不是指被表達的重組蛋白是Animal-Free的。我們知道,重組蛋白通常是用大腸桿菌表達的,而大腸桿菌的培養基中需要添加胰蛋白胨(Trypton)等動物來源的組分,這些組分不可避免的在隨后表達出來的重組蛋白中摻入諸多不明的動物成分。雖然最后純化出來的重組蛋白的純度可達98%或99%,但另外1%中很可能含有來自胰蛋白胨的其它動物成分,這些動物成分雖然含量極微,但可能在重組蛋白應用于人體或動物時,將其中所含動物病原體(如瘋牛病病毒及其它未知病原體)傳染給人和動物。而且,這些動物成分中的異源蛋白也會引起人和動物的異體排斥或過敏反應。因此,當重組蛋白在應用過程中可能接觸到人體或動物體時(如細胞治療和動物體內實驗等),請盡量選用Animal-Free的重組蛋白。

PeproTech的無動物成分重組蛋白是在獨立的完全無動物成分的生產車間中生產出來的,同時生產過程中不會使用到胰蛋白胨等任何含動物成分的培養基或試劑,因此可保證最終的重組蛋白中不含任何動物成分,非常適合于臨床前試驗和動物研究。

PeproTech的無動物成分產品的產品編號均以AF為前綴。PeproTech現已有44種無動物成分的人、小鼠和大鼠重組蛋白,并在不斷快速增加。而且有些常用的細胞因子,如人EGF(表皮生長因子)已經完全采用無動物成分的生產方式,即不再提供含動物成分的人EGF。


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